“Esta publicação fala sobre o efeito neuro-protetor do ginseng contra os efeitos da exposição a radiação eletromagnética. Foi elaborado na Korea que é um grande produtor de ginseng. Acredito que não é bom ouvir muito a história de vendedor mas me lembro muito bem que bem antes de conhecer a hipersensibilidade eletromagnética, bem no início dos sintomas, me sentia muito estressado e sem a capacidade de me concentrar. Quando tomava os comprimidos de complexos vitamínicos com ginseng, o meu quadro melhorava bastante. Agora vendo esta matéria, achei interessante compartilhar com todos os que procuram uma melhora na sua saúde. O duro é encontrar dentre as dezenas de marcas nas farmácias um que seja bom e tenha o prometido na bula. Sempre lembrando que o melhor para a saúde de quem possa ter hipersensibilidade eletromagnética é o afastamento das fontes de poluição eletromagnéticas.” Milton A S
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Link original: http://www.hindawi.com/journals/bmri/2013/812641/
BioMed Research International
Volume 2013 (2013) , Artigo 812641 , 12 páginas
http://dx.doi.org/10.1155/2013/812641
Research Article
Efeito Neuro-protetor do Ginseng contra alteração de Cálcio Proteínas de Ligação Imuno reatividade no hipocampo Ratos após exposição a radiofreqüência
Dhiraj Maskey , Jin -Koo Lee, Kim Hak Rim e Hyung -Gun Kim
Departamento de Farmacologia da Faculdade de Medicina, Dankook Translational Research Center, University Dankook , 119 Dandaero , Anseo -dong, Dongnam -gu, Cheonan, Chungnam 330-714 , República da Coréia
Recebido 10 de junho, 2013 , aceito 23 de julho de 2013
Editor do Acadêmica: Thomas Van Groen
Copyright © 2013 Dhiraj Maskey et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob a Licença Creative Commons Attribution , que permite uso irrestrito , distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que a obra original , devidamente citada .
abstrato
Proteínas de ligação de cálcio ( CaBPs ) como calbindina D28 – k , a parvalbumina e calretinina são capazes de se ligar de Ca2 + com alta afinidade . Alterações na concentração de Ca2 + através CaBPs pode perturbar a homeostase de Ca2 + . Dano cerebral podem ser induzidas por um campo electromagnético prolongada ( CEM ) de exposição com perda de equilíbrio interacellular Ca2 + . O presente estudo investigou o efeito radioprotetor de ginseng em relação a CaBPs imunorreatividade (IR) no hipocampo através de imunohistoquímica após a exposição de um mês em 1,6 valor de SAR , comparando simulado com grupos expostos expostos e tratados com ginseng separadamente. Perda de arborização dendrítica foi observado com os CaBPs nas áreas cornu Ammonis , bem como uma diminuição da intensidade da coloração das células granulares do giro dentado após a exposição quando nenhuma perda foi observada no grupo tratado com o ginseng . Uma diferença significativa em relação à densidade média foi observada entre os grupos de controlo e expostas, mas não foi significativa no grupo tratado com o ginseng . Diminuição da CaBP IR com alterações na coloração neuronal como observados no grupo exposto afectaria o circuito trisynaptic hipocampal por alteração da concentração de Ca2 + o qual poderia ser evitada por ginseng . Assim , o ginseng pode contribuir como um agente radioprotector contra a exposição a CEM , que contribui para a manutenção da homeostase do Ca2 + através da prevenção da insuficiência intracelulares níveis de Ca2 + no hipocampo .
1 . introdução
Ginseng , a raiz de Panax ginseng C. A. Meyer, é um medicamento amplamente utilizado ervas com inúmeros efeitos eficazes , mas que possui uma taxa muito baixa de efeitos colaterais, tornando-se assim um dos mais vendidos remédios naturais mais o suplemento alimentar mais popular [1] . Ginseng desempenha um papel importante no sistema nervoso central (SNC ), [ 2 , 3 ] provando ser eficaz na atenuação de défices de aprendizagem devida a danos cerebrais e de envelhecimento em humanos e animais [ 4-7 ] . Os efeitos benéficos da raiz do ginseng sobre a aprendizagem e memória são frequentemente atribuídos a ginsenoside Rb1 ( Rb1 ) , o que aumenta o efeito estimulante de crescimento de neuritos [8] . Estudos sugerem que Rb1 protege os neurônios do hipocampo contra isquemia [9] ou neurodegeneração induzida por glutamato [10] , estabelecendo ginseng como um agente neuroprotetor contra várias lesões cerebrais traumáticas experimentais que levam à possibilidade de sua eficácia contra o campo eletromagnético (EMF) radiofreqüência (RF ) lesão nos subcampos do hipocampo.
Um rápido avanço no campo das telecomunicações levou a um aumento dramático no uso da tecnologia de telefonia móvel , gerando interesse nos efeitos biológicos e possíveis efeitos na saúde dos campos elétricos e magnéticos. O uso extensivo de telefones celulares levanta questões de seus possíveis efeitos biológicos [11] , devido à exposição a CEM , em especial sobre o SNC. Usuários móveis freqüentes têm constantemente queixou-se de dores de cabeça, sensação de calor durante longos períodos de comunicação [12] , e os distúrbios do sono [13] . Dada a proximidade do dispositivo móvel para o cérebro, as taxas de absorção específica (SAR mais elevado ) ocorrem nesta parte do corpo , em comparação com outras partes do corpo [14] . A influência da RF em funções neuronais, incluindo a regulação da plasticidade sináptica , a liberação do neurotransmissor , a sobrevivência neuronal, e aprendizagem e na memória , também foi relatada [15] . Recentemente, também foi relatado de perda de células piramidais das áreas CA , bem como o giro denteado [ 16-18 ] , instigada principalmente por estudos de possíveis efeitos de exposição a RF , em modelos animais . Apesar de vários estudos biológicos , epidemiológicos e toxicológicos , os potenciais efeitos adversos da exposição a RF sobre o SNC ainda são controversos [19] .
Alteração da via de sinalização intracelular via mudanças na distribuição ou membrana iônica fluidez podem ser influenciados por EMF [14] . Fisiológica de cálcio ( Ca2 + ), a entrada em neurónios regula o desenvolvimento normal neuronal , metabolismo , e envelhecimento e está envolvido no controlo da transmissão sináptica e a sua modulação longo prazo [ 20 ] , com níveis elevados de Ca2 +, levando a degeneração neuronal [ 21 ] . Radiofreqüência (RF) a exposição pode induzir Ca2 + efluxo do cérebro e neurônios isolados [ 22-24 ] . Homeostase do Ca2 + no cérebro é regulado por sistemas de influxo e efluxo mas também é afetada por proteínas de ligação de cálcio ( CaBPs ) .
Ca2 + desempenha um papel complexo como um moderador importante de uma série de processos fisiológicos vitais como a excitabilidade neuronal , o transporte axonal , a síntese e a libertação de neurotransmissores , a permeabilidade da membrana , e as actividades de enzima [ 25 ] . Neuronal de Ca2 + pode desempenhar um papel na sobrevivência de neurónios , bem como a morte celular programada e degeneração neuronal patológica com perturbação de Ca2 + que conduz a regulação efeitos letais [ 26 ] . Por isso , uma regulação eficiente do Ca2 + livre intracelular concentração é crucial para a função neuronal e a sobrevivência , o que pode ser conseguido por um mecanismo de absorção activo de estruturas de membrana interna da célula , tais como as mitocôndrias e retículo endoplasmático bem como CaBPs . Tendo em vista a importância da homeostase do Ca2 + em numerosos processos para a viabilidade das células , incluindo neurónios , e modulação de Ca2 + intracelular concentração , CaBPs como calbindina D28 – k ( CB ) , parvalbumina ( PV ) , e calretinina ( CR ) , pertencente ao EF – tipo de lado, poderia desempenhar um papel crucial na regulação da homeostase do Ca2 + por tamponamento do Ca2 + intracelular concentração e transporte de Ca2 + [ 27] . Um papel neuroprotector com uma única função , como um tampão de citoplasmática de Ca2 + foi postulada para CaBPs , o comprometimento do que leva à falha de tamponamento do Ca2 + intracelular e a morte neuronal [ 28 ] . CaBP caracteriza tipos neuronais específicas no sistema nervoso central [ 29 ] , entre os quais PV , CB [ 30 ] , e CR [ 30 ] são considerados marcadores neuronais excelentes para uma subpopulação dos neurónios do hipocampo . Perda de CaBPs tem sido associada com Ca2 + homeostase deficiente e está relacionado com ambos os défices neuronais e comportamentais [31] . Assim, desregulação da homeostase do Ca2 + pode contribuir para os processos de memória prejudicada do hipocampo . Caracterização de CaBPs é importante à medida que cada neurónio pode estar associada com determinadas propriedades funcionais , perda de que podem conduzir a diferentes manifestações .
Considerando-se o efeito relatado dos componentes ginseng purificados como agentes radioprotectores em roedores irradiados [10 , 32] e CaBP implicado como um importante regulador da degeneração neuronal patológica , esses dois fatores podem ser usados para medir o dano devido à exposição RF e observar a benéfica efeito ginseng pode ter como radioprotetora nas subáreas do hipocampo contra lesão RF . Por isso, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do ginseng no CaBP IR nas diferentes subáreas do hipocampo após exposição 835 MHz RF a SAR de 1,6 W / kg para 1 mês .
2 . Materiais e Métodos
2.1 . Red Ginseng Extratos
Extratos de ginseng vermelho (GV ) fabricados pela Coréia do Ginseng Corporation ( Seul, Coréia do Sul ) foram utilizados em todos os experimentos . RG foi feita por tratamento com vapor raízes frescas de 6 anos de idade, as plantas de P. ginseng , a 90 ° C a 100 ° C durante 3 horas e subsequente secagem a 50 ° C a 80 ° C. RG foi extraída sete vezes com água destilada à temperatura de 85 ° C durante 8 horas , seguido por arrefecimento . RG continha 0,52 mg / g de grandes ginsenoside – Rg1 , 4.03 mg / g de – Rb1 , 2.89 mg / g de – RG3 ( s ) , 1,18 mg / g de – Re , 1.98 mg / g de – Rc , 1,97 mg / g de – Rb2 , 1.51 mg / g de – Rd , e outros ginsenósidos menores .
2.2 . Animais
Seis semanas de idade, 20-30 g ICR ( Orient Bio Inc. ) ratos do sexo masculino ( ) foram utilizados para a experiência . Após a chegada , os animais foram randomizados e alojados seis por gaiola, sob a condição de 20 a 25 ° C. Alimentos e água foram fornecidas ad libitum. Os ratos foram aclimatados durante uma semana . Todos os procedimentos com animais foram realizados de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes de pesquisas com animais e foram aprovados pela Universidade Dankook Institutional Animal Care e Use Committee ( DUIACUC ), que adere às orientações emitidas pela Instituição de Laboratório de Recursos Animais ( ILAR ) . Antes de conduzir o estudo , os ratinhos foram divididos em três grupos ( ) : ( A) controlo simulado ( SC ) , ( B ) exposto ( E1.6 ) , e ( C ) expostos tratados com 30 mg / kg de RG ( G1.6 ) .
2.3 . Sistema de Radiofreqüência exposição
O sistema de exposição ( Onda Exposer V20 ) foi descrito em detalhe [ 18 ] . Resumidamente, uma onda Exposer V20 emitindo 835 MHz equivalente ao Acesso Múltiplo por Divisão de Código -coreano (CDMA) freqüência de telefonia móvel foi projetado pela Divisão de Engenharia Tecnologia da Informação, Universidade de Soonchunhyang . SAR (Taxa de absorção específica ) foi controlado 1,6-4,0 W / kg , que é o mesmo valor que a intensidade do campo elétrico entre 59,56 e 94,18 V / m para o músculo (= 0,92, = 57, e = 1020 Kg/m3) em 835 MHz CDMA. As ondas foram gerados e amplificado em uma unidade electrónica e , eventualmente, foram irradiadas por uma antena de corneta piramidal rectangular ligado por um condutor de ondas de transição coaxial . Uma gaiola de rato padrão de 22 centímetros foi usado para o aparelho . Potências de saída de chifre antena do aparelho de exposição são de 2,5 W para SAR de 1,6 W / kg e 6,3 W para SAR 4,0 W / kg. Intensidades de campo eléctrico devido a valores de SAR podem ser calculados e do valor de energia foi obtida por uma simulação de computador com HFSS (High Frequency Structure Simulator ), fabricado pela Ansoft Co. (Pittsburgh , PA , EUA). 5 modelos em forma de cilindro de ratos foram usados para a simulação . A variável de simulação foi tanto a localização camundongos ea abertura formulário chifre distância para os ratos se movendo livremente. O poder foi obtido pela média das intensidades de campo elétrico de pico simulados em cada corpo mouse. A exposição a ondas de trompa de antena para a gaiola de rato foram fornecidas pelo material de absorção de onda ( TDK absorvedor de cerâmica ) que imita a exposição à radiação em ambiente aberto , o que limita a influência do número de ratos pode ter em exposição . O aparelho de exposição fornece um sistema de luz automático e sistema de ar condicionado com um alimentador de água , sem restrição de movimento durante a exposição eliminar o estresse durante a exposição.
2.4 . Projeto Experimental e condição de exposição
Para a experiência de exposição a RF , todo o corpo dos ratos foi exposto a radiação de 835 MHz para um mês com SAR média de 1,6 W / kg , usando instrumento onda Exposer V20 . A solução de extracto de RG foi preparado de um solvente que consiste em 0,9 % de NaCl e 4 % de Tween 80 e foi administrado por via oral antes de exposição de acordo com o peso do indivíduo . A exposição foi realizada durante cinco horas por dia durante 30 dias consecutivos, para cada grupo . Três horas depois da exposição final , no dia 30 , os animais foram anestesiados com éter etílico , e os seus cérebros foram recolhidos usando perfusão e procedimento de fixação com uma solução salina de tampão fosfato e uma solução de paraformaldeído a 4 % .
2.5 . Análise imuno-histoquímica
Os cérebros foram removidos do crânio e foram pós-fixadas em paraformaldeído durante 24 horas. Em seguida, os tecidos cerebrais foram crioprotegidos após imersão de uma série de solução de sacarose ( 10 % , 20 % e 30 % ) a 4 ° C , até que se afundou . Secção coronal Serial, 40 mM , foi cortada com o congelamento , deslizando micrótomo e coletado em poços. Três experimentos separados com os três grupos em simultâneo de imuno-histoquímica foram realizadas com o método flutuante livre . CB policlonal anti – coelho ( AB1778 ; Millipore , CA , EUA ) , anticorpo policlonal de coelho anti- PV ( AB15736 ; Millipore , CA , EUA ) , e CR policlonal anti – cabra ( AB1550 ; Millipore , CA , EUA ) foram aplicadas a secções do cérebro razões de diluição de 1 : 5000 , 1 : 10.000 , e um : 15.000 , respectivamente , em solução salina tampão de fosfato com base tampão contendo 1 % de albumina de soro bovino , 0,3 % de Triton X – 100 , e 1 % de soro normal de cavalo a bloquear . As secções foram incubadas durante 48 horas a 4 ° C. Após três lavagens com tampão fosfato salino , as secções foram incubadas com os anticorpos secundários biotinilados a uma razão de diluição de 1 : 250 , durante 1,5 horas à temperatura ambiente . Após lavagens adicionais , os cortes foram montados em lâminas revestidas de gelatina , desidratados em etanol , diafanizadas em xilol e cover- escorregou com DPX .
2.6 . Imagem e Análise Estatística
A análise foi realizada sob Olympus BX 51 microscópio, e as imagens das seções foram tiradas por um sistema de câmera digital microscópio ( DP50 , Olympus , Japão). O programa de imagem de NIH ( Scion imagem) foi usada para determinar as densidades de coloração . A soma dos valores cinzentos de todos os pixels de uma região seleccionada foi dividido pelo número total de pixels na região seleccionada para determinar a densidade média de imunorreactividade por unidade de área ( mm 2 ) . Matematicamente , a densidade média = Imunoreatividade / Área ( mm -2). Os dados são expressos em média ± SD. Comparação entre a densidade média dos diferentes subcampos do hipocampo ( CA1 , CA3 e giro denteado ) entre o grupo sham e grupos expostos foi feito individualmente de Student não pareado . As diferenças foram consideradas significativas a .
3 . resultados
3.1 . Observações histomorfométricas
3.1.1 . Calbindina D28 -k Imunoreatividade
CA1 e CA3 e subcampos do giro dentado de todos os três grupos mostraram a presença de neurónios CB – positivos ( Figuras 1 ( a) -1 ( i ) ) . Várias camadas de área CA1 como lacunosum estrato (SL) , estrato radiante (SR ) e oriens estrato (SO ) de todos os três grupos apresentaram CB histoquímica corpos células piramidais e espalhados neurônios multipolares ( Figuras 1 ( a) -1 ( c) ) . Células CB – positivo fracamente algumas estavam presentes no estrato piramidal ( SP ) da área CA1 . Neurónios individuais intensamente marcadas foram observadas na região do SR / SL da área CA1 do os grupos SC e G1.6 , que foram caracterizados por meio de processos finos arborizadas , provavelmente correspondendo aos interneurónios ( Figura 2 ( a) ) . No entanto , os neurónios da mesma região do E1.6 exibido coloração ligeira juntamente com uma falta de dendritos ( Figura 2 ( b ) ) . Células altamente corados com arborização dendrítica fina foram observados no SR de área CA3 ambos os grupos SC e G1.6 ( Figuras 2 ( g ) e 2 ( i ) ) , enquanto que a mesma região de E1.6 consistia de células muito fracamente marcadas que faltavam arborização dendrítica ( Figura 2 ( h ) ) .
fig1
Figura 1: Fotomicrografia de calbindina D28 -k ( CB ) imunorreatividade (IR) em cortes coronais através dos subcampos do hipocampo de controle sham ( SC) (a, d, g ) , expostos a radiofreqüência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e tratados com ginseng ( G1.6 ) ( C, F , I) os grupos . CA1 ( a-c ) e áreas CA3 ( g – i ) mostram vários neurónios CB – positivo . Nas várias camadas de CA1 , piramidal CB IV ( setas finas ) e outro interneurônio (setas de espessura) foram as células em todas as áreas de três tipos (A-C ) observado . Etiquetagem forte das células de grânulos e fibras musgosas (MF) foi detectado no giro dentado , que foi bastante reduzida em E1.6 ( f ) . Área CA3 do SC revelou alguns CB neurônios imunopositivas do SR de todos os três tipos ( g- i) . SO : oriens estrato ; SP: estrato pyramidale ; SR : estrato radiatum ; SLM : estrato lacunosum moleculare ; SL : estrato lucidum ; ML : camada molecular ; GL : camada granular ; PL : camada polimórfica . Barra de escala = 100 pm .
fig2
Figura 2 : Imagem ampliada de calbindina D28 -k ( CB ) imunorreatividade (IR) nos subcampos de controle sham ( SC) (a, d, g ) , expostos a radiofreqüência ( E1.6 ) (b, e, h ) , e ( G1.6 ) ( c , f , i) os grupos tratados com o ginseng . Foi observada perda de coloração no soma ( setas ) , assim como os dendritos dos neurónios da área CA1 do E1.6 ( c ) . GL de E1.6 ( e) exibido células granulares fracamente marcados ( setas) em comparação com o SC ( d ) . Células granulares foram altamente coradas em G1.6 ( f ) . A área CA3 revelou neurônios com uma coloração escura com dendrites (seta) patência fora , que foram observadas em SC ( g ) e G1.6 (i). No entanto , E1.6 ( h ) apresentada neurónios muito fracamente marcadas que faltam (seta) arborizações dendríticas ( i) . Escala da barra = 50 m.
Giro denteado ( DG ) de todos os três grupos apresentaram a presença de CB IR muito distintamente . Camada granular ( GL ) foi altamente corados , em comparação com a camada molecular ( PM) e da camada polimórfica ( PL ) em todos os três grupos (Figura 1 ( d ) -1 ( f ) ) . Decremento perceptível de CB IR foi observada no DG de E1.6 ( Figura 1 ( e) ) , enquanto tal decréscimo não estava presente na G1.6 , em comparação com o SC ( Figura 1 ( f ) ) . Os corpos celulares e as dendrites de células de grânulos eram o principal centro de localização de CB IR na DG , juntamente com as fibras musgosas de PL , que poderia ser seguido se projecta em direcção ao estrato lúcido ( SL ) das áreas CA3 (Figura 1 ( d ) – 1 ( f ) ) . Muito fraco CB IR foi observado nas células granulares de E1.6 , em comparação com SC , enquanto tal diferença não foi observada entre SC e G1.6 ( Figuras 2 ( d ) 2 ( f)).
3.1.2 . parvalbumina Imunoreatividade
Ampla distribuição de PV IR foi observado na região do hipocampo ao longo das áreas de CA1 e CA3 , bem como no giro dentado . SO da área CA1 apresentada consistia de várias células multipolares e bipolares , que também foram vistos no SP ( Figuras 3 (a) -3 ( c)). O SP da área CA1 exibido PV neurónios imunopositivas , consistindo de axónios longas e finas que atravessam o SR ( Figuras 3 ( a) e 4 ( a) ) . Decremento grave de PV IR nos neurónios de E1.6 foi observado (Figura 3 ( b ) e 4 ( b ) ) , mas não era tão grave em G1.6 , em comparação com o SC ( Figuras 3 ( c ) e 4 ( c ) ) . Perpendicularmente executando fibras imunorreactivas PV foram notadas na SC e G1.6 ( Figura 3 ( c ) ) , mas foram observados para ser diminuída em E1.6 ( Figura 3 ( b ) ) . Altamente PV neurónios imunorreactivos e processos foram anotados para ser distribuída em todos os sub-campos de área CA3 do SC e G1.6 ( Figuras 4 ( g ) e 4 ( i ) ) , mas foram reduzidos significativamente em E1.6 ( Figura 4 ( h ) ) .
fig3
Figura 3 : Fotomicrografia de parvalbumina ( PV ) imunoreactividade ( IR ) em secções coronais ao longo dos subcampos do hipocampo de controlo simulado ( SC ) ( um , d , g) , expôs – radiofrequência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e ( G1.6 ) ( c , f , i) os grupos tratados com o ginseng . Decréscimo significativo de PV IR foi observada no E1.6 quando comparado com o SC e G1.6 ( a-i ) . PV neurônios imunopositivas foram observadas em SO e SP camadas (A-C ), que foram muito fracamente rotulados em E1.6 (c). Fibras imunorreativas PV foram anotados para ser executado de forma perpendicular em SR . Vários neurônios positivos altamente PV junto com dendrites que atravessam o ML foram observadas no GL do DG . Uma perda acentuada de IR foi observado na camada granular do E1.6 ( e), que não foi observado em G1.6 ( f ) . Área CA3 revelou várias fibras imunorreativas PV junto com poucos neurônios distribuídos ao longo dos subcampos. Diminuição do IR foi observado em E1.6 ( h ) , em comparação com o SC ( g ) e G1.6 ( i ) . SO : oriens estrato ; SP: estrato pyramidale ; SR : estrato radiatum ; SLM : estrato lacunosum moleculare ; SL : estrato lucidum ; ML : camada molecular ; GL : camada granular ; PL : camada polimórfica . Barra de escala = 100 pm .
Fig4
Figura 4 : imagem ampliada de parvalbumina ( PV ) imunoreactividade ( IR ) nos subcampos de controlo simulado ( SC ) ( um , d , g ) , expôs – radiofrequência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e ginseng tratada ( G1.6 ) ( C, F , I) os grupos . Os neurónios (setas) presentes na área CA1 do E1.6 ( b ) mostraram uma diminuição na PV IR, o que pareceu ser muito altamente marcado em SC ( um ) . Do mesmo modo , a intensidade da coloração dos neurónios na camada granular foi bastante reduzida em E1.6 ( e) , juntamente com os seus axónios (setas) , em comparação com o SC ( d ) e G1.6 ( f ) . Área CA3 também revelaram perda de IR nos neurónios (setas) , assim como os dendritos de E1.6 ( h ) . Escala da barra = 50 m.
PV IV foi detectada em todas as três camadas de giro dentado , bem como nas fibras musgosas de todos os três grupos , em grau variável ( Figuras 3 ( d ) -3 ( f ) ) . A camada granular mostrou neurônios altamente immunapositive enquanto o PL consistiu de neurônios levemente manchados. Os neurônios no GL eram de fusiforme , triangular, ou de forma estrelada e deu o fora dendrites que pareciam estar a correr para o ML , bem como o PL ( Figuras 4 ( d ) -4 ( f)). Comparado com SC, nenhuma perda de PV IR foi observado nos neurônios do GL de G1.6 (Figura 4 ( f) ), mas parecia altamente diminuir no E1.6 . Axônios Muito levemente manchadas foram anotados para ser executado através do ML (Figura 4 (e)) .
3.1.3 . calretinina Imunoreatividade
Alterações específicas da camada de CR IR foram observadas nas áreas CA , assim como o DG . Áreas CA1 e CA3 mostrou CR IR na camada subgranular juntamente com interneurônios dispersos. Bipolar fortemente marcado dispersos , multipolar e neurónios piramidais foram observadas no SL , SR , SO e das áreas CA1 ( Figuras 5 ( a) -5 ( c ) ) . Numerosas células altamente corados com arborização axonal foram observadas no SO , SP, e SLM enquanto um plexo densa de fibras finas IR também foi destaque no SR de CA1 em todos os três grupos (Figuras 5 ( a) -5 ( c)). Perda de axonal e arborização dendrítica dos neurônios em SP de E1.6 mostrou perda de coloração nos axônios e arborização dendrítica de E1.6 , em comparação com o SC e G1.6 (Figura 6 ( c)). Um padrão similar de CR IR foi observado na área CA3 de todos os três grupos , com intensidade variável ( Figuras 6 ( g ) -6 ( i ) ) . CA3 de SC e G1.6 mostrou neurônios individuais dispersos com numerosos arborização dendrítica , juntamente com fibras imunorreativas altamente coradas (Figura 6 (g) ), enquanto E1.6 perda de arborização dendrítica e uma diminuição na intensidade da coloração das fibras imunorreativas exibido com grave decremento de neurônios corados (figuras 6 (g) 6 ( i)).
fig5
Figura 5 : Fotomicrografia de calretinina ( CR ) imunoreactividade ( IR ) em secções coronais ao longo dos subcampos do hipocampo de controlo simulado ( SC ) ( um , d , g ) , expôs – radiofrequência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e ( G1.6 ) ( c , f , i) os grupos tratados com o ginseng . Área CA1 consistia em fortes neurônios imunorreativos CR em SO e SLM junto com fibras imunorreativas finas. A perda severa de coloração neuronal , bem como CR IR foi observado em CA1 de E1.6 ( b ) . Intense CR IR foi detectado no IML com os neurônios infragranular altamente manchados ( d -f) . Fibras imunorreactivas intensamente marcadas com alguns neurónios parecia estar presentes na área CA3 . Diminuição grave de IR foi observado no E1.6 ( h ) , em comparação com o SC ( g ) e G1.6 ( i ) . SO : oriens estrato ; SP: estrato pyramidale ; SR : estrato radiatum ; SLM : estrato lacunosum moleculare ; SL : estrato lucidum ; OML : camada molecular externa ; IML : camada molecular interna ; GL : camada granular ; PL : camada polimórfica . Barra de escala = 100 pm .
fig6
Figura 6 : imagem ampliada de calretinina ( CR ) imunoreactividade ( IR ) nos subcampos de controlo simulado ( SC ) ( um , d , g ) , expôs – radiofrequência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e ginseng tratada ( G1.6 ) ( C, F , I) os grupos . Note-se a perda de coloração em axónios (setas) na área CA1 do E1.6 ( b ) que pareceu estar intacto em SC ( a) e G1.6 ( c ) . Redução da intensidade de coloração , bem como perda severa dos neurónios infragranular (setas) foi observada no giro dentado de E1.6 ( e) , em comparação com o SC ( d ) e G1.6 ( f ) . CR neurónios imunopositivas apresentaram intensa arborização dendrítica ( setas ) na região CA3 do SC ( g ) e G1.6 ( i ) , mas esta era ausente em E1.6 ( h ) . Escala da barra = 50 m.
Intense CR IR foi observado no neuropil da camada molecular interna ( IML) com coloração moderada nas outras camadas. Neurónios infragranular fortemente imunorreactivas foram observados no SC ( Figura 5 ( d ) ) e G1.6 ( Figura 5 ( e) ) que ilustra arborização dendrítica intensa presumivelmente passando para a camada molecular externa ( OML ) através do CR imuno IML de DG . Neurónios infragranular de E1.6 exibida perda de intensidade da coloração ( Figura 6 ( e) ) . O hilo do DG do SC e G1.6 mostrou intensas CR IR plexos dendríticas , junto com alguns neurônios manchados, mas estes foram destaque diminuiu em E1.6 ( Figuras 5 ( d ) -5 ( f)).
3.2 . Análise imunoreatividade
3.2.1 . CB Imunoreatividade
Avaliação de análise de imagens da distribuição de densidade média de CB IR em todas as subáreas do hipocampo (Figura 7 (a) ) apresentou as maiores níveis no GL enquanto a mais baixa foi observada na área de PL em todos os três grupos. CB IR em todos os sub-campos do hipocampo foi anotado para ser grandemente reduzida na E1.6 , em comparação com outros grupos .
figura 7
Figura 7: Análise de imagens de densidade relativa de calbindina D28 -k ( a) , parvalbumina ( b) , e calretinina ( c) imunorreatividade (IR) mudanças na região do hipocampo ( CA1 , CA3 e giro denteado ) de controle sham ( SC ) ( a, d , g ) , expostas ao radiofrequência ( E1.6 ) ( b, e , h ) , e tratados com ginseng ( G1.6 ) C, F , I) ( grupos . Diminuição significativa no IV foi observado em E1.6 nos vários diferentes subcampos do hipocampo , em comparação com SC . Os dados apresentados são os valores médios ± DP obtidos de três experimentos diferentes. ,,,, E , em comparação com SC .
E1.6 mostrou diferença significativa de IR em CA1 ( ) , CA3 ( ) , ML ( ) , GL ( ) , e PL ( ) , em comparação com o SC ( Fig. 7 ( a) ) . Comparação de G1.6 com SC apresentou diferença significativa apenas no GL (). Nenhuma diferença significativa foi observada no CA1 , CA3 , ML, e áreas PL de G1.6 , quando comparado com SC (Figura 7 ( a)).
3.2.2 . PV Imunoreatividade
Na avaliação da análise de imagem , a densidade média relativa de diferentes subcampos das regiões do hipocampo foi calculada de modo a comparar a distribuição PV IR entre o SC , E1.6 , G1.6 e grupos . PV IR foi observada a ser significativamente inferior em todas as áreas da formação do hipocampo do E1.6 do que aqueles de SC ( Figura 7 ( b ) ) . Todos os três grupos apresentaram o maior IR PV no GL do DG , eo menor foi observado nas áreas do ML e PL .
Foi observada diferença significativa na área CA1 ( ) , área CA3 ( ) , e GL ( ) do E1.6 quando comparados com CS ( Figura 7 ( b ) ) . Da mesma forma , a comparação entre SC e G1.6 revelou diferença significativa na área de ML () , enquanto os CA1 , CA3 , GL , PL e áreas não mostraram nenhuma diferença significativa entre os grupos SC e G1.6 (Figura 7 (b)) .
3.2.3 . CR Imunoreatividade
Análise de densidade média relativa foi realizada para medir o CR IR nos subcampos do hipocampo de todos os grupos ( Figura 7 ( c ) ) . A maior CR IR foi observada no IML , enquanto o mais baixo foi observado no OUL em todos os três grupos . O CR IR era inferior, em todos os sub-campos do hipocampo do E1.6 , em comparação com o SC ( Fig. 7 ( c ) ) . Quando comparado com o SC , E1.6 mostrou mudanças significativas em CA1 ( ) , CA3 ( ) , CMO ( ) , GL ( ) , e PL ( ) ( Figura 7 ( c ) ) . Nenhuma diferença significativa foi observada entre os grupos SC e G1.6 em todos os subcampos do hipocampo (Figura 7 ( c)).
4 . discussão
No presente estudo , foi avaliada a CaBP IR nas subáreas do hipocampo para examinar os efeitos radioprotetor do extrato RG contra a exposição RF de 835 MHz a SAR de 1,6 W / kg em um mês a 5 horas / dia. O estudo forneceu resultados que mostram os efeitos protetores do RG contra a exposição a CEM , demonstrando que RG pode ser útil como radioprotetora no SNC.
CaBPs como CB , PV , e CR têm um papel importante na manutenção da homeostase de Ca2 + intracelular , e o seu padrão de distribuição específica no SNC sugere o seu envolvimento nas actividades neuronais importantes . CB está associada com regulação de Ca2 + intracelular e está implicado como um marcador população neuronal [ 33 ] . PV é conhecido para o buffer de Ca2 , contribuindo para a manutenção das propriedades sinápticas [ 34 ] , enquanto CR desempenha um papel passivo de tamponamento uma limitação do aumento de Ca2 + intracelular livre [ 35 ] . A alteração na expressão de CaBP podem conduzir a estados patológicos e condições neurodegenerativas , devido à sua capacidade de tamponamento de Ca2 + o qual poderia influenciar diversas funções, tais como as vias de sinalização segregando limitando difusões de cálcio [ 36 ] . Ca2 + é um componente importante de funções celulares normais e medeia a maioria dos efeitos fisiológicos desencadeados pelo EMF e os iões que são libertados das suas reservas intracelulares . Interações de Ca2 + na membrana celular foram identificados como o primeiro elo da bioeffects de RFR . Lançamento do neurotransmissor que transfere sinais entre neurônios requer um pré-requisito do fluxo programado de íons de Ca2 + através das membranas . Perturbação levando a Ca2 + vazamento iria aumentar a concentração do fundo , tornando as células de hipersensibilidade, com a transmissão de sinais espúrios que obscurecem a actividade mental normal , desencadear pensamentos aleatórios e perda de concentração [ 37 ] . Assim , a diminuição induzida pelo EMF RF na expressão CaBPs como observado no presente estudo poderia diminuir Ca2 + buffer de capacidade, levando à morte celular .
RG tem sido utilizada na medicina oriental há milhares de anos, com ginsenósidos como o seu principal componente bioactivo desempenha um papel importante no sistema nervoso central [ 2 , 3 ] . Ginsenosídeos pode modular as funções de vários receptores e canais iónicos nos neurónios , incluindo a N – metil – D – aspartato ( NMDA) [5, 6 ] e canais de Ca2 + [ 38 ] . A inibição de um aumento no influxo de Ca2 + por RG tem sido observado nos neurónios do hipocampo submetidos ao oxigénio / privação de glucose [ 39 ] . RG tem sido sugerido para actuar como um agente neuroprotector , mediando a inibição do influxo de Ca2 + através de ambos os canais do receptor de NMDA e canais de Ca2 + dependentes da voltagem de tipo L + , com a consequente redução de Ca2 + livre intracelular [ 39 ] . Inibição do influxo de Ca2 + por RG foi avaliado em um glutamato ( 0,5 mM ) do modelo a toxicidade de neurónios do hipocampo em cultura de ratos [ 40] . Descobertas similares nos neurônios do hipocampo em cultura também foram observados por vários estudos [ 41-43 ] . Da mesma forma, no presente estudo , o grupo tratado com ginseng não mostraram efeitos nocivos da exposição EMF , que também apoia as conclusões mencionadas anteriormente consolidar ainda mais suas capacidades radioprotectores .
Com o crescente crescimento da comunicação móvel, um aumento na densidade EMF ocorreu o que pode influenciar a função neuronal, liberação de neurotransmissores , a sobrevivência neuronal, e aprendizagem e memória [15] . O presente estudo observou perda de neurónios no CA , bem como na camada granulosa , após a exposição a EMF . Perda severa da arborização dendrítica foi notada. Semelhante ao nosso estudo , dano neuronal e perda de célula na área de CA do hipocampo de ratos fêmea foi observado após a exposição a 900 MHz [ 16 , 17 ] , enquanto que a exposição pré-natal revelado decréscimo no número de células granulares no giro dentado [ 44 ] por morte das células e a inibição da diferenciação de células estaminais neurais para dentro dos neurónios [ 45 ] . Diferentes regiões do hipocampo mostrou diferente susceptibilidade a lesões. Decréscimo de CaBPs IR nas subáreas do hipocampo ( CA1 , CA3 e giro denteado ) está a ser fortemente notado como esta parte do cérebro é um elo importante no circuito trisynaptic hipocampo relacionada à memória e aprendizagem [46] .
Hiper Sensibilidade Eletromagnética 